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線粒體膜通透性轉換孔(MPTP)檢測試劑盒

簡要描述:線粒體膜通透性轉換孔(MPTP)檢測試劑盒
檢測試劑盒采用BBcellProbe® M61粒體膜通透性轉換孔熒光探針檢線粒體膜通透性轉換孔的激活情況。線粒體膜通透性轉換孔(mitochondrial permeablity transition pore,mPTP),又稱線粒體巨型通道(magachannel),是存在于線粒體內外膜之間的一組蛋白復合體,由多種蛋白質復合組成,是存在于線粒體內

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2025-09-18
  • 訪  問  量:517

詳細介紹

保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
1.長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。 2.試劑A和試劑C為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
有效期
一年
檢測方法
流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦/熒光酶標儀/熒光光度計
適用樣本
細胞
產品應用
流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦/熒光酶標儀/熒光光度計
儀器準備
1.流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦/熒光酶標儀/熒光光度計 2.離心機 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液 2.HBSS
耗材準備
1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套
使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。 2.BBcellProbe® M61探針和陽性誘導劑為DMSO溶液,冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解,吸頭也需要放在培養箱預熱,否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。融解后離心至管底部再打開螺旋蓋。 3.BBcellProbe® M61探針為了便于觀察防止誤操作導致損失,在試劑盒中時是采用透明管包裝,收到后可以離心移入干燥黑色避光密封管或者用鋁箔包裹避光。 4.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。 5.染色后立即進行分析。 6.標記的條件因細胞種類而異,根據不同樣本的實際染色結果做相應調整,在每次實驗前,請先確定條件。以下方法僅供參考。 7.BBcellProbe® M61探針容易受潮,受潮后穩定性較差,注意干燥保存。 8.吸取BBcellProbe® M61探針母液時要用干燥的新吸頭,不能使用含水的吸頭。 9.未使用完的BBcellProbe® M61探針母液請擰緊螺旋蓋,避免受潮失效。 10.BBcellProbe® M61探針工作液含水,配制后不可以長期保存,須現配現用。 11.陽性誘導劑配制工作液后可以保存。 12.M61探針和陽性誘導劑融解后離心至管底部再打開螺旋蓋,防止開蓋時損失。
使用方法
試劑配制: 1.BBcellProbe® M61染色工作液(I)配制: 根據樣品數量用試劑D稀釋液稀釋 BBcellProbe® M61探針5倍,配制成BBcellProbe® M61染色工作液(I)染色液,充分混勻。 2.陽性誘導劑工作液(II)配制: 根據樣品數量用試劑D稀釋液10倍稀釋 陽性誘導劑(10X),配制成1X 陽性誘導劑工作液(II),充分混勻。 細胞染色 1.用HBSS將樣品細胞制備成單細胞懸液,使其密度為1×106細胞/ml以上。 2.按照500ul每管制備細胞懸液,并記錄編號。 后續染色順序: 1號管僅含BBcellProbe® M61探針(陰性對照,選做); 2號管含BBcellProbe® M61探針和熒光淬滅劑(待測樣品細胞); 3號管含BBcellProbe® M61探針,熒光淬滅劑和陽性誘導劑(陽性性對照,選做); 另外需要準備一管不加以上試劑的細胞樣品(4號管)用于流式儀器設置。 3.向上述每個樣品的細胞中分別加入5µl BBcellProbe® M61染色工作液(I)并充分混勻。 4.將所有1號2號3號樣品管在37℃避光孵育15分鐘。 5.向2號、3號管中加入5ul熒光淬滅劑,并混勻。 6.向3號管中加入5µl-10ul 陽性誘導劑工作液(II),并充分混勻。 7.將所有1號2號3號樣品管在37℃避光孵育15分鐘。 8.離心力1000×g以下離心5分鐘收集細胞。 9.用500µl HBSS重懸細胞。 10.染色后,將樣品置于冰上,1小時內進行流式分析。 細胞檢測 用不含試劑的細胞樣品(4號管)進行流式儀器設置。 用流式488nm激發器進行熒光分析,BBcellProbe® M61探針激發波長495nm,發射波長515nm。 1號管-僅含BBcellProbe® M61探針:線粒體和胞漿有熒光,熒光信號較強; 2號管-含BBcellProbe® M61探針和淬滅劑:僅線粒體呈現熒光,熒光強度居中; 3號管-含BBcellProbe® M61探針,熒光淬滅劑和陽性誘導劑:陽性對照細胞。線粒體和胞漿熒光均被淬滅,熒光信號最弱。 2號管熒光信號強度的變化說明線粒體通透性轉換孔被激活的情況。
參考文獻
1.Weiqi Wu et al. Kaempferol protects mitochondria and alleviates damages against endotheliotoxicity induced by doxorubicin Biomedicine & Pharmacotherapy 2020 (IF=3.743) 2.Qing Zhou et al. Tetramethylpyrazine alleviates iron overload damage in vascular endothelium via upregulating DDAHII expression Toxicology in Vitro 2020 (IF=3.067) 3.Xiaomin Zhao et al. Circular RNA CircEZH2 Suppresses Transmissible Gastroenteritis Coronavirus-induced Opening of Mitochondrial Permeability Transition Pore via Targeting MiR-22 in IPEC-J2 International Journal of Biological Sciences 2019 (IF=4.067) 4.Siqi Zhou et al. Magnolol induces apoptosis in osteosarcoma cells via G0/G1 phase arrest and p53‐mediated mitochondrial pathway Journal of Cellular Biochemistry 2019 (IF=3.448) 5.Jing Ye et al. Diosbulbin B-Induced Mitochondria-Dependent Apoptosis in L-02 Hepatocytes is Regulated by Reactive Oxygen Species-Mediated Autophagy Frontiers in Pharmacology 2019 (IF=3.845)

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