CCK8是一種基于 WST-8 的新型細胞增殖與毒性檢測試劑盒，其反應終止液的正確使用直接影響實驗結果的準確性和可靠性。以下從作用機制、使用時機、操作規范及注意事項等方面詳細闡述關鍵要點。

　　一、核心作用與科學原理

　　CCK8 依賴 WST-8 底物被活細胞線粒體脫氫酶還原為橙黃色甲臜產物的特性實現定量分析。反應終止液通過快速滅活殘留的脫氫酶活性，阻斷未參與反應的 WST-8 繼續轉化，從而固定顯色強度。若未及時終止，持續產生的甲臜會導致吸光度虛高，造成假陽性結果。

　　二、精準把控使用時機

　　1. 時間窗控制：嚴格按實驗方案設定孵育時間后立即加入終止液。以標準 96 孔板為例，建議在培養終點時刻逐孔依次添加，避免因延遲引入誤差。

　　2. 同步化操作：多塊板子或大批量樣本處理時，可采用排槍同步加樣，確保各孔終止時間一致。若需分批次操作，需記錄精確的時間差并進行后續校正。

　　三、標準化操作流程

　　1. 預混勻準備：終止液使用前需充分顛倒混勻(尤其含結晶成分的配方)，避免沉淀導致濃度不均。部分產品需恢復至室溫后再開啟，防止低溫析晶。

　　2. 精準配比：根據試劑盒說明書推薦比例添加，常見為每孔加入與培養基等體積的終止液。過量可能導致溶液溢出或影響比色體系；不足則無法全部終止反應。

　　3. 溫和混勻：加樣后輕震孔板使液體混合均勻，靜置一段時間讓顏色穩定后再讀數。避免劇烈震蕩產生氣泡干擾測定。

　　四、關鍵注意事項

　　1. 避光防護：終止后的溶液對光敏感，需盡快完成測讀。若需暫存，應用錫紙包裹或轉移至避光容器，并在規定時間內完成檢測。

　　2. 溫度控制：終止液及反應體系應保持在同一溫度環境下操作，溫差可能導致體積變化或化學反應速率異常。

　　3. 污染防控：避免反復吹吸終止液造成交叉污染，推薦使用一次性移液器槍頭。若不慎接觸皮膚或眼睛，立即用清水沖洗并就醫。

　　4. 廢液處理：終止液含潛在生物危害成分，需按實驗室規范收集于專用容器，經滅活處理后再丟棄。

　　五、常見問題規避

　　- 顯色過淺/過深：除細胞數量外，需排查終止液是否失效(過期或儲存不當)、添加量是否準確。可設置空白對照孔驗證背景值。

　　- 邊緣效應：U 形底 96 孔板邊緣孔易因蒸發損失體積，建議外圍孔填充 PBS 緩沖液平衡濕度。

　　- 干擾因素：某些藥物或溶劑可能與終止液發生化學反應，此時需優化實驗設計或更換檢測方法。

　　CCK8 反應終止液的使用是決定實驗成敗的關鍵步驟之一。研究者需嚴格遵循“及時、準確、一致”的原則，結合試劑盒說明書與實際實驗條件優化操作細節。通過規范化操作，可顯著提升數據的重復性和可信度，為細胞活力評估提供堅實基礎。